SLA-Ⅰα链和β链的原核表达与抗血清制备

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.07.020

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (7): 1224-1231.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.07.020

SLA-Ⅰα链和β链的原核表达与抗血清制备

刘莹，杜吉革，盖新娜，周磊，郭鑫^*，杨汉春^*

（中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人兽共患病重点实验室，北京 100193）

收稿日期:2014-10-13 出版日期:2015-07-23 发布日期:2015-07-23
通讯作者: 郭鑫，教授，Tel：010-62731296，E-mail：guoxin@cau.edu.cn；杨汉春，教授，E-mail：yanghanchun1@cau.edu.cn
作者简介:刘莹（1989-），女，江苏徐州人，硕士，主要从事动物病毒学与免疫学研究，E-mail：liuying8943@163.com
基金资助:
教育部博导基金（20120008110039）；国家973项目（2014CB542701）

Prokaryotic Expression of SLA-Ⅰ α Chain and β Chain and Antiserum Preparation

LIU Ying，DU Ji-ge，GE Xin-na，ZHOU Lei，GUO Xin^*，YANG Han-chun^*

（Key Laboratory of Animal Epidemiology and Zoonosis of the Ministry of Agriculture，College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

Received:2014-10-13 Online:2015-07-23 Published:2015-07-23

摘要/Abstract

摘要：

猪主要组织相容性复合体Ⅰ类分子又称猪白细胞抗原Ⅰ类分子（SLA-Ⅰ），参与内源性抗原在体内的递呈过程，其结构包括重链（α链）和轻链（β链）两部分。本研究首先采用RT-PCR从原代猪肺泡巨噬细胞（PAM）中扩增出SLA-Ⅰ α链胞外区基因和β链基因；继而利用原核表达系统获得包涵体形式表达的SLA-Ⅰ α链胞外区和β链重组蛋白质；将目的重组蛋白质洗涤、复性、纯化后，经Western blot及质谱技术进行验证。以纯化的重组蛋白质免疫兔制备抗血清，经间接ELISA检测其效价达1∶256 000。以制备的抗血清进行Western blot和间接免疫荧光试验，结果显示，所制备的抗血清能够特异性地识别原代及传代PAM表达的SLA-Ⅰ α链及β链蛋白。研究结果不仅为SLA-Ⅰ类分子的功能研究提供了有用的分析试剂，也为病毒感染的免疫机制研究奠定了必要的基础。

Abstract:

The swine major histocompatibility complex class Ⅰ or swine leukocyte antigen class Ⅰ (SLA-Ⅰ)，made of the heavy chain (α chain) and light chain (β chain)，is involved in the process of endogenous antigen presenting.In the present study，we first amplified the genes of the extracellular region in SLA-Ⅰα chain and β chain from porcine alveolar macrophage (PAM) using RT-PCR.The two genes were then cloned into the prokaryotic expression vectors and induced to express in the form of inclusion bodies.After being washed，refolded and purified，the recombinant proteins were confirmed by western blot and mass spectrometer.Then，the rabbit antiserum against the recombinant proteins was prepared with titers of 1：256 000 by an indirect ELISA.Finally，the antiserum was used in Western blot and indirect immunofluorescence assay，showing that the antiserum can specifically react with SLA-Ⅰ α chain and β chain expressed in both PAM and PAM cell line 3D4/21.This study not only provides useful reagents for analyzing the function of SLA-Ⅰ，but also develops the basis for further study on the mechanisms associated with immune responses induced by viral infections.

中图分类号:

S852.4

刘莹，杜吉革，盖新娜，周磊，郭鑫，杨汉春. SLA-Ⅰα链和β链的原核表达与抗血清制备[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(7): 1224-1231.

LIU Ying，DU Ji-ge，GE Xin-na，ZHOU Lei，GUO Xin，YANG Han-chun. Prokaryotic Expression of SLA-Ⅰ α Chain and β Chain and Antiserum Preparation[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(7): 1224-1231.

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